酸化ストレスマーカー：マロンジアルデヒド(MDA)測定キット

Rev.131017

ＭＤＡ測定キット(TBARS法)
Malondialdehyde Assay Kit

（本製品は研究用試薬です。）

【代表的な脂質過酸化マーカー】

マロンジアルデヒド（malondialdehyde: MDA）は脂質過酸化分解生成物の一つであり、脂質過酸化の主要なマーカーとして広く用いられています。
多価不飽和脂肪酸(PUFA)は活性酸素種/フリーラジカルによる酸化を受けやすく、例えばヒドロキシラジカル（HO・）と容易に反応して脂質ペルオキシラジカル（LOO・）を形成します。この脂質ペルオキシラジカル（LOO・）は、さらに別の多価不飽和脂肪酸（PUFA）と反応して脂質ヒドロペルオキシド（LOOH）と脂質ペルオキシラジカル（LOO・）を形成します。また、脂質ペルオキシラジカル（LOO・）は分子内2重結合に反応して環状エンドペルオキシドを形成し、これがさらに分解されて MDAが形成されます。

【測定原理】

本キットはサンプル中のマロンジアルデヒドをチオバルビツール酸（TBA）と反応させることで MDA-TBA₂付加体を形成させます。この付加体は532nmの波長付近に強い吸収を持つことから、分光学的にMDAを検出します。

バッファーや培養上清などのサンプルでは、532nmの吸光度を測定することでMDAを簡単に検出できます（左図青線）。一方、尿、血漿、組織ホモジネートといったサンプルでは、バックグラウンドの吸収が高くなるケースがあります（緑および赤線）。このようなケースでは、分光光度計により400～700nmの吸光スペクトル（分解能1nm）を測定し、 3rd delivative analysis（3次微分解析）を行うことで、MDA-TBA₂付加体のシグナルを正確に検出できます。

品名	商品コード	測定波長	価格（税込）
MDA測定キット（TBARS法）	KMD-008W	532nm又は400～700nm吸光スペクトル	88,000円
MDA測定用ELISAキット	KMD-493K	450nm 血清/血漿MDA検出に最適 ※上記TBARSキットとは測定原理が異なります	－
抗MDAモノクローナル抗体	MMD-030n	30μg マウス由来IgG。全動物種に適用可能。	44,000円
尿/血清 MDA受託検査	測定原理：TBARS法／検体提出量：1.5mL(最少0.5mL) 動物検体対応可能。最少検体数：10		7,700円

【製造元】：Northwest Life Science Specialities LLC, USA

【製品仕様】

● 測定対象：	マロンジアルデヒド
● 測定原理：	TBA反応生成物を用いた分光分析
● 測定レンジ：	0.08～10μmol/L
● 所要時間：	約1.5時間
● サンプル所要量：	250μL
● テスト数：	200テスト
● 必要な器具：	マイクロプレートリーダー（測定波長532nm）または分光光度計（400～700nm）^※、ヒートブロック又はウォーターバス（60℃）、マイクロピペット（10μLおよび250μL用）、エッペンチューブ用遠心機 ※サンプルの種類により単波長測定か、スペクトル測光かを選択します。
● 保存条件：	冷蔵（2～8℃）

【キットの構成】

1）TBA試薬：	2-thioberbituric acid （5本）	蒸留水10.5mLを加え、よく攪拌して溶解します。
2）BHT試薬：	Buthylated hydroxytoluene溶液（2.5mL）	そのまま使用します。
3）酸試薬	1M リン酸溶液（10mL*5本）	そのまま使用します。
4）アッセイバッファー：	EDTA含有リン酸バッファー pH7.0（125mL）	そのまま使用します。
5）キャリブレーター：	Tetramethoxypropane溶液（0/1/2/3/4μM MDA当量）	そのまま使用します。

【測定手順】

Step 1）	エッペンチューブにBHT試薬を10μL分注します。
Step 2）	キャリブレーターまたはサンプルを250μL添加します。
Step 3）	酸試薬を250μL添加します。
Step 4）	TBA試薬を250μL添加します。
Step 5）	ボルテックスでよく攪拌します（約5秒）。
Step 6）	60℃にて60分間インキュベートします。
Step 7）	10,000 Gにて2～3分遠心します。
Step 8）	532nmの吸光度または400～700nmの吸光スペクトル（推奨：1～2nm 間隔）を測定します。
Step 9）	吸光データから、MDA濃度を算出します。

【参考文献】

1)	Biomarkers of free radical damage applications in experimental animals and in humans. Free Radic Biol Med 26(1-2), p202-226 (1999), de Zwart LL, Meerman JH, Commandeur JN, Vermeulen NP.
2)	Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal, malonaldehyde and related aldehydes. Free Radic Biol Med 11(1), p81-128 (1991), Esterbauer H, Schaur RJ, Zollner H.
3)	Malondialdehyde and thiobarbituric acid-reactivity as diagnostic indices of lipid peroxidation and peroxidative tissue injury. Free Radic Biol Med 9(6), p515-540 (1990), Janero DR.
4)	Improved analysis of malondialdehyde in human body fluids. Free Radic Biol Med 20(2), p251-256 (1996), Jentzsch AM, Bachmann H, Furst P, Biesalski HK.
5)	Reactions of 1-methyl-2-phenylindole with malondialdehyde and 4-hydroxyalkenals. Analytical applications to a colorimetric assay of lipid peroxidation. Chem Res Toxicol 11(10), p1176-1183 (1998), Gerard-Monnier D, Erdelmeier I, Regnard K, Moze-Henry N, Yadan JC, Chaudiere J.
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7)	Determination of malondialdehyde as dithiobarbituric acid adduct in biological samples by HPLC with fluorescence detection: comparison with ultraviolet-visible spectrophotometry. Clin Chem 47(9), p1725-1727 (2001), Lykkesfeldt J.
8)	Grapefruit seed extract moderates morphologic, functional and biochemical evidences of epidoxorubicin-induced testicular toxicity. J Med Sci 7(4), p650-654 (2007), LC Saalu, T Kpela, LAJ Shittu, OA Ashiru.
9)	Sildenafil extends survival and graft function in a large animal lung transplantation model. Eur J Cardio-thoracic Surg 29, p288-293 (2006), Stephan Korom, Sven Hillinger, Markus Cardell, Wei Zhai, Qiang Tan,Andre Dutly, Boris Leskosek, Walter Weder.

【ご注意】本製品は研究用試薬です。研究以外の用途（臨床検査/診断/医療行為等）には使用できません。