ホーム > 製品情報 タンパク質酸化損傷マーカー > ニトロチロシン測定キット [印刷用ページ] Rev.140714
タンパク質酸化損傷マーカー
Biomarkers for protein oxidation in nitrosative stress. oxidative stress 酸化ストレス
ニトロチロシン測定キット
Nitrotyrosine ELISA kit
(本製品は研究用試薬です。)
【数多くの疾病に関連するNOストレスマーカー】
 一酸化窒素(NO)は生体内において重要な生理機能を担う一方、NOはスーパーオキサイド(O2-)と 反応することでパーオキシナイトライト (Peroxynitrite: ONOO-)を形成し、活性窒素種(Reactive nitrogen species: RNS)として細胞や組織の障害に 深く関わっていることが明らかにされつつあります1)

ニトロチロシン(3-nitrotyrosine: 3-NT)は、パーオキシナイトライトによる主要なタンパク質ニトロ化修飾物の一つであり、 ニトロ化ストレス(nitrosative stress)マーカーとして広く用いられています。これまでにアルツハイマー、パーキンソン氏病、 多発性硬化症、脳卒中などの神経疾患をはじめ、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠動脈疾患、高血圧症など数多くの疾患との 関連性が報告されています。

本キットはサンドイッチELISA法によりニトロシル化修飾タンパク質を測定します。
【製品仕様】
● 測定対象: 血清または血漿
● 特異性: ニトロシル化修飾タンパク質
● 測定レンジ: 2~1500 nM
● 所要時間: 約4時間
● サンプル所要量: 100μL/well
● テスト数: N=2のとき80サンプル(96ウェル x 2枚)
● 必要な器具: ピペットおよびチップ(50~1000μL可変容量)、蒸留水、ポリプロピレン製試験管、 マイクロプレートリーダー(測定波長450nm)
● 保存条件: 冷蔵(2~10℃ ・凍結不可)
【キットの構成】
1. マイクロプレート 96wells x 2枚(分割式)
2. スタンダード 4本(1500 nM)
3. サンプル希釈液(x10濃縮) 15mL
4. 標識抗体(x100濃縮 ビオチン標識-抗ニトロチロシン抗体) 2本
5. HRPコンジュゲート(HRP標識-ストレプトアビジン) 1本 使用当日に調製します。
6. TMB基質液 22mL そのまま使用します。
7. 反応停止液 22mL そのまま使用します。
8. 洗浄液(x40濃縮) 30mL
9. プレートシール 4枚
※操作方法等は予告なく改訂される場合があります。ご使用前に商品同梱の使用説明書を必ずご確認ください。
【測定手順】
1. 使用する試薬を常温に戻しておきます。
2. 使用するウェルをフレームに取付け、残ったウェルは袋に密閉し冷蔵保管します。
3. 試薬を調製します。洗浄液、希釈液、標識抗体、HRPコンジュゲートは 必要量のみ希釈して調製します。
4. スタンダードを調製します。
5. サンプルを用意し、必要に応じて希釈します。
6. 調製したスタンダードまたはサンプルを100μL/ウェル分注します。
7. プレートシールでウェルを密閉し、室温にて1時間インキュベートします。
8. 液を捨て、希釈済み洗浄液 200μL/ウェルを入れ20秒待ち排液。4回洗浄します。
9. 希釈済み標識抗体試薬を100μL/ウェル分注します。
10. プレートシールでウェルを密閉し、室温にて1時間インキュベートします。
11. 液を捨て、希釈済み洗浄液 200μL/ウェルを入れ20秒待ち排液。4回洗浄します。
12. 希釈済みHRPコンジュゲート試薬を100μL/ウェル分注します。
13. プレートシールでウェルを密閉し、室温にて1時間インキュベートします。
14. 液を捨て、希釈済み洗浄液 200μL/ウェルを入れ20秒待ち排液。4回洗浄します。
15. TMB試薬を100μL/ウェル分注します。
16. プレートシールでウェルを密閉し、室温にて20~30分インキュベートします。
17. 反応停止液を100μL/ウェル分注します。
18. 450nmにおける吸光度を測定し、検量線を用いてニトロチロシン濃度を算出します。
【参考文献】
1) Protein 3-Nitrotyrosine in Complex Biological Samples: Quantification by High-Pressure Liquid Chromatography/Electrochemical Detection and Emergence of Proteomic Approaches for Unbiased Identification of Modification Sites. Tal Nuriel, Ruba S. Deeb, David P. Hajjar, and Steven S. Gross: Methods Enzymol 441,p1-17(2008)
2) Nitrotyrosine in plasma of celiac disease patients as detected by a new sandwich ELISA. Steege JC, Koster-Kamphuis L, van Straaten EA, Forget PP, Buurman WA. Free Radic Biol Med 25(8), p953-963 (1998)
品名 商品コード 測定波長 容量 価格
ニトロチロシン測定キット KNT-002W 450nm 96wells * 2 140,000円(税別)

【製造元】:Northwest Life Science Specialities LLC, USA (受注生産品)
※2014年7月に価格改定されております※

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【関連商品】

※上記商品とはメーカーが異なるため、検出特性が異なる場合があります。ご留意ください。

品名 商品コード 測定波長 容量 価格
血漿ニトロチロシン測定キット KNT-150D 450nm 96wells 95,000円(税別)

【製造元】:Immundiagnostik AG, Germany   

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