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レドックス/アンチエイジング関連マーカー
Biomarkers for redox regulations or anti-aging medicine. oxidative stress 酸化ストレス
ヒト ペルオキシレドキシン-1測定キット
Human Peroxiredoxin 1 ELISA kit
(本製品は研究用試薬です。)
【多彩な機能を持つ抗酸化酵素】


ペルオキシレドキシン(Peroxiredoxin: Prx)は最近発見された、強い抗酸化作用を持つペルオキシダーゼの一種です。 バクテリア、酵母、高等植物、哺乳類にいたる殆ど全ての生物において見出されており、細胞内において多量に存在 することから、細胞の生理機能を維持する上で 重要な抗酸化酵素であると考えられています。ペルオキシレドキシンは生体内において過酸化水素や アルキル化ヒドロペルオキシドの分解に関与するほか、細胞内セカンドメッセンジャーである過酸化水素を通じたシグナル制御、 さらに、c-Abl, caspase, NFκB、AP-1を介して細胞増殖やアポトーシスに関わる、 多機能性タンパク質であることが明らかにされています。

ペルオキシレドキシンは1次配列の相同性から、一群のタンパク質ファミリを形成しており、ヒトにおいては Prx-1~6の6種類が知られています。中でもPrx-Iはペルオキシレドキシンファミリーの中で、量的に最も多く、 肝臓、小腸、腎臓など様々な臓器に存在することが報告されています。Prx-Iはc-Ablのようながん遺伝子産物との 相互作用を介して、細胞増殖とアポトーシスに関与することが示唆されており、肺がん、乳がん、食道がん、口腔がん、 甲状腺がんにおいてPrx1発現量が高まることが報告されています。

本キットは、血清、血漿、組織中を対象にヒト ペルオキシレドキシンI (Prx-I)を測定するELISAキットです。
【製品仕様】
● 測定対象: ヒト血清、血漿、細胞懸濁液
● 特異性: ヒトPrx-I に特異的。ヒトPrx-II,III,IV,V,VI、マウスPrx-I およびラットPrx-I には反応しません。
● 測定レンジ: 0.5 ~ 32 ng/mL
● 所要時間: 約4時間
● サンプル所要量: 100μL/well
● テスト数: 96 wells (N=2のとき40サンプル)
● 必要な器具: マイクロプレートリーダー(測定波長450nm)、マイクロピペット(5~1000μL用)、マルチチャネルピペット、 蒸留水
● 保存条件: 冷蔵(2~10℃ ・凍結不可)
【測定手順】
1. 使用前に、全ての試薬を室温(20~25℃)に戻しておきます。
2. スタンダードを調製します。試験管を8本用意し、サンプル希釈液968μLに対しスタンダード (1μg/mL)32μLを添加し、よく混和します。さらに、Prx-I 濃度が、16ng/mL、8ng/mL、4ng/mL、2ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mLとなるよう サンプル希釈液を使って系列希釈を行います(500μL + 500μL)。0μg/mLのスタンダードには、サンプル希釈液をそのまま用います。
3. サンプルを調製します(ヒト正常血漿の場合、サンプル希釈液にて2~5倍希釈を推奨)。
4. マイクロプレートを準備します。マイクロプレートの全てのウェルに、アッセイバッファー300μLを分注し 室温にて5分間静置します。液を捨て、希釈済み洗浄液を使って2回洗浄(300μL x 2回)します。
5. 希釈済みスタンダードおよびサンプルを100μL/well分注し、シールしたのち室温にて2時間静置します。
6. 液を捨て、希釈済み洗浄液を用いて3回洗浄します。
7. 希釈済み2次抗体を100μL/well分注し、シールしたのち室温にて1時間静置します。
8. 液を捨て、希釈済み洗浄液を用いて3回洗浄します。
9. 希釈済みコンジュゲートを100μL/well分注し、シールしたのち室温にて30分間静置します。
10. 液を捨て、十分に液を切ったのち、希釈済み洗浄液を用いて3回洗浄します。
11. TMB試薬を100μL/well分注し、室温にて10~15分間静置します。
12. 反応停止液を100μL/well分注し、マイクロプレートリーダーにて450nmの吸光度を測定します。
13. 検量線を引き、サンプルの吸光度からPrx-I濃度を算出します。
※操作方法等は予告なく改訂される場合があります。ご使用前に商品同梱の使用説明書を必ずご確認ください。
【キットの構成】
1. マイクロプレート (96wells x 1枚)
2. スタンダード(ヒト ペルオキシレドキシン-I ) 1本 サンプル希釈液 1 mLを添加して溶解します(1μg/mL)。
3. サンプル希釈液 25mL
4. 2次抗体(x100濃縮 ビオチン標識-抗ヒト チオレドキシンI抗体) 150μL 使用前に、100倍容量の試薬希釈液と混合します。
5. 試薬希釈液 25mL
6. コンジュゲート(x100濃縮 アビジン-HRP) 150μL 使用前に、100倍容量の試薬希釈液と混合します。
7. アッセイバッファー 30mL そのまま使用します。
8. TMB基質液 15mL そのまま使用します。
9. 反応停止液 15mL そのまま使用します。
10. 洗浄液(x20濃縮) 25mL x 2本 19倍容量の蒸留水と混合して使用します。
11. プレートシール 3枚
【参考文献】
1) Peroxiredoxins: a historical overview and speculative preview of novel mechanisms and emerging concepts in cell signaling. Rhee SG, Chae HZ, Kim K: Free Radic Biol Med 38(12),p1543-5152(2005)
2) Advances in our understanding of peroxiredoxin, a multifunctional, mammalian redox protein.
Fujii J, Ikeda Y: Redox Rep 7(3),p123-130 (2002)
3) Increased expression of mitochondrial peroxiredoxin-3 (thioredoxin peroxidase-2) protects cancer cells against hypoxia and drug-induced hydrogen peroxide-dependent apoptosis. Nonn L, Berggren M, Powis G: Mol Cancer Res 1(9),p682-689(2003).
4) Structure, mechanism and regulation of peroxiredoxins. Wood ZA, Schroder E, Robin Harris J, Poole LB: Trends Biochem Sci 28(1),p32-40(2003)
5) Structural basis of peroxiredoxin functions. Hirotsu S, Abe Y, Nishino T, Hakoshima T: PNE 45(15),p2463-2474(2000)
品名 商品コード 測定波長 価格
ペルオキシレドキシン-I 測定キット KPX-005W 450nm 90,000円(税別)

【製造元】:Northwest Life Science Specialities LLC, USA  (受注生産品)

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