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| （研究用試薬） |
| 販売中止 |
| 【重要な細胞内レドックス制御因子】 |
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チオレドキシン（Thioredoxin: Trx）とは、分子内に酸化還元活性を有するSH基を持つ抗酸化酵素で、
酸化ストレス/活性酸素からの保護作用を示すほか、細胞内シグナル伝達にも関与する多機能タンパク質です。
チオレドキシン システム（左下図）は、チオレドキシン、チオレドキシン還元酵素、NADPHより構成される、
細胞内における主要な
抗酸化機構の一つであり、古細菌からヒトに至るまで普遍的に存在しています。還元型チオレドキシンは、酸化された
標的タンパク質に結合し、標的タンパク質のジスルフィド結合（S-S）をチオール基（-SH）に還元、チオレドキシン自身の
チオール基は酸化されます。酸化型チオレドキシンは、NADPHの存在下でチオレドキシン還元酵素の作用により還元され、
再び還元型に戻ります。
チオレドキシンの機能としては、抗酸化作用のほか、細胞内においてp53、NF-κB、Ref-1、AP-1といった転写因子の
制御に関わっているほか、Aktパスウェイを介したアポトーシスへの関与も報告されています。また、近年、
膵臓がん、大腸がん、肺がん等においてTrxの過剰発現が報告されているほか、様々な疾患との関連性が指摘されており、
こうした疾患における酸化ストレス/レドックスのマーカーとして有用と考えられています。
チオレドキシンには、構造、分布の異なる3種類のフォームが知られており、Trx-1は細胞質に、Trx-2はミトコンドリアに、
Sp-Trxは精子に存在します。本キットはヒト血清および細胞を対象に、Trx-1を測定するELISAキットです。
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| 【製品仕様】 |
| 測定対象： |
ヒト血清、血漿、細胞懸濁液などに含まれるヒトチオレドキシン1（Trx-1） |
| 特異性： |
ヒトTrx-1に特異的。ヒトTrx-2、マウスTrx-1およびラットTrx-1に対する交差反応性なし |
| 測定レンジ： |
0.4 ～ 25 ng/mL |
| 所要時間： |
約4時間 |
| サンプル所要量： |
100μL/ウェル |
| 容量： |
96 well |
| 必要な器具： |
マイクロプレートリーダー（測定波長450nm）、マイクロピペット（5～1000μL用）、マルチチャネルピペット、
蒸留水
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| 保存条件： |
冷蔵（2～10℃ ・凍結不可） |
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| 【測定手順】 |
| 1. |
使用前に、全ての試薬を室温（20～25℃）に戻しておきます。 |
| 2. |
スタンダードを調製します。試験管を8本用意し、サンプル希釈液975μLに対しスタンダード（1μg/mL）
25μLを添加し、よく混和します（25ng/mL）。さらに、Trx-1 濃度が、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.13ng/mL、1.56ng/mL、0.78ng/mL、
0.39ng/mLとなるようサンプル希釈液を使って系列希釈を行います（500μL + 500μL）。0ng/mLのスタンダードには、
サンプル希釈液をそのまま用います。 |
| 3. |
サンプルを調製します（ヒト正常血漿の場合、サンプル希釈液にて5～10倍希釈を推奨）。 |
| 4. |
マイクロプレートを準備します。マイクロプレートの全てのウェルに、アッセイバッファー300μLを
分注し 室温にて5分間静置します。液を捨て、希釈済み洗浄液を使って2回洗浄（300μL x 2回）します。 |
| 5. |
希釈済みスタンダードおよびサンプルを100μL/well分注し、シールしたのち室温にて2時間静置します。 |
| 6. |
液を捨て、希釈済み洗浄液を用いて3回洗浄します。 |
| 7. |
希釈済み2次抗体を100μL/well分注し、シールしたのち室温にて1時間静置します。 |
| 8. |
液を捨て、希釈済み洗浄液を用いて3回洗浄します。 |
| 9. |
希釈済みコンジュゲートを100μL/well分注し、シールしたのち室温にて30分間静置します。 |
| 10. |
液を捨て、十分に液を切ったのち、希釈済み洗浄液を用いて3回洗浄します。 |
| 11. |
TMB試薬を100μL/well分注し、室温にて10～15分間静置します。発色し過ぎないよう、時間を調整します。 |
| 12. |
反応停止液を100μL/well分注し、20分以内にマイクロプレートリーダーにて450nmの吸光度を測定します。 |
| 13. |
検量線を引き、サンプルの吸光度からTrx-1 濃度を算出します。 |
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| ※操作方法等は予告なく改訂される場合があります。ご使用前に商品同梱の使用説明書を必ずご確認ください。 |
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| 【キットの構成】 |
| 1. |
マイクロプレート |
使用直前にアッセイバッファーを添加、洗浄します（96wells） |
| 2. |
スタンダード（ヒトチオレドキシン1） |
1本 サンプル希釈液1mLを添加して溶解します（1μg/mL） |
| 3. |
サンプル希釈液 |
25mL スタンダード及びサンプルの希釈に使用します |
| 4. |
2次抗体（x 100濃縮 ビオチン標識-抗ヒト チオレドキシン1抗体） |
150μL 使用時に100倍容量の試薬希釈バッファーと混合します |
| 5. |
試薬希釈バッファー |
25mL そのまま使用します |
| 6. |
コンジュゲート（x 100濃縮 アビジン-HRP） |
150μL 使用時に100倍容量の試薬希釈バッファーと混合します |
| 7. |
アッセイバッファー |
30mL そのまま使用します |
| 8. |
TMB基質液 |
20mL そのまま使用します |
| 9. |
反応停止液 |
20mL そのまま使用します |
| 10. |
洗浄液（x 10濃縮） |
100mL 9倍容量の蒸留水と混合して使用します |
| 11. |
プレートシール |
3枚 |
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| 【参考文献】 |
| 1) |
Protein disulfide-isomerase is a substrate for thioredoxin reductase and has thioredoxin-like activity.
Lundstrom J, Holmgren A: J Biol Chem 265(16), p9114-9120 (1990)
|
| 2) |
Thioredoxin regulates the DNA binding activity of NF-kappa B by reduction of a disulphide bond
involving cysteine 62.
Matthews JR, Wakasugi N, Virelizier JL, Yodoi J, Hay RT: Nucleic Acids Res 20(15), p3821-3830(1992)
|
| 3) |
Isoforms of mammalian peroxiredoxin that reduce peroxides in presence of thioredoxin.
Chae HZ, Kang SW, Rhee SG: Methods Enzymol 300, p219-226 (1999)
|
| 4) |
Physiological functions of thioredoxin and thioredoxin reductase.
Arner ES, Holmgren A: Eur J Biochem 267(20), p6102-6109 (2000)
|
| 5) |
Thioredoxin nuclear translocation and interaction with redox factor-1 activates the activator
protein-1 transcription factor in response to ionizing radiation.
Wei SJ, Botero A, Hirota K, Bradbury CM, Markovina S, Laszlo A, Spitz DR, Goswami PC, Yodoi J, Gius D:
Cancer Res 60(23),p6688-6695 (2000)
|
| 6) |
Reactive oxygen species, antioxidants, and the mammalian thioredoxin system.
Nordberg J, Arner ES: Free Radic Biol Med 31(11), p1287-1312 (2001)
|
| 7) |
The roles of thioredoxin in protection against oxidative stress-induced apoptosis in SH-SY5Y cells.
Andoh T, Chock PB, Chiueh CC: J Biol Chem 277(12), p9655-9660 (2002)
|
| 8) |
From oxygen sensing to heart failure: role of thioredoxin.
Hoshino Y, Shioji K, Nakamura H, Masutani H, Yodoi J: Antioxid Redox Signal 9(6),p689-699 (2007)
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| 品名 |
商品コード |
測定波長 |
価格（税込） |
| チオレドキシン1 測定キット |
KRX-004W |
450nm |
販売中止 |
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【製造元】：Northwest Life Science Specialities LLC, USA
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※製品の仕様、価格、操作方法等は予告なく変更される場合があります。
特に操作方法につきましては、ご使用前に商品同梱の使用説明書を必ずご確認ください。 |
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【関連商品】：
| 品名 |
商品コード |
仕様 |
価格（税込） |
| チオレドキシン活性測定キット |
KRX-711X |
比色法340nm・動物検体対応 |
212,300円 |
| ペルオキシレドキシン活性測定キット |
KPX-511X |
比色法340nm・動物検体対応 |
260,700円 |
| ヒト ペルオキシレドキシンI (Prx-I)測定キット |
KPX-005W |
96ウェル・ELISA法450nm |
販売中止 |
| ヒト ペルオキシレドキシンⅢ測定キット |
KPZ-002W |
96ウェル・ELISA法450nm |
販売中止 |
| ヒト チオレドキシン還元酵素Ⅰ測定キット |
KRR-004W |
96ウェル・ELISA法450nm |
販売中止 |
| グルタチオン測定キット |
KGS-001W |
192ウェル・比色法405nm |
55,000円 |
| GSHペルオキシダーゼ測定キット |
KGX-005W |
192ウェル・比色法340nm |
66,000円 |
| GSH還元酵素測定キット |
KGR-015W |
192ウェル・比色法340nm |
66,000円 |
| 抗ペルオキシレドキシン I 抗体（100μL) |
SPR-101K |
免疫組織染色用 |
66,000円 |
| 抗ペルオキシレドキシン II 抗体（100μL) |
SPR-102K |
免疫組織染色用 |
66,000円 |
| チオレドキシン測定キット（マウス） |
KRX-640K |
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180,400円 |
| チオレドキシン測定キット（ウサギ） |
KRX-244K |
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172,700円 |
| チオレドキシン測定キット（ラット） |
KRX-644K |
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188,100円 |
| チオレドキシン結合蛋白2測定キット（ヒト） |
KT-29618T |
|
176,000円 |
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一部の商品は受注生産のため、予告なく製品の改廃、価格変更等が行われる場合があります。
ご注文の際には、弊社担当者まで予めご確認ください。
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