日本老化制御研究所酸化ストレスマーカー：抗8-OHdG/8-oxodG抗体による免疫組織染色プロトコル DNA酸化マーカーの検出

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Rev.061219

抗8-OHdG/8-oxo-dG抗体による免疫組織染色プロトコル
Immunohistochemical detection of 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine by N45.1 antibody.

弊社抗8-OHdG抗体を使用した免疫組織染色実施例をご紹介いたします。実施にあたっては実際にご使用になるサンプルに合わせて実験条件をご検討ください。

● 固定：	ホルマリン固定した組織や、培養細胞の場合には「抗原賦活プロセス」が必要です。ブアン固定の場合には「抗原賦活プロセス」は不要です。
● 使用濃度：	5～10μｇ/ｍL（但し、8-OHdGが大量に産生されている場合には1～10μｇ/ｍL）
● 反応条件：	4℃、一晩
● ブロッキング：	DAKO社正常ウサギ血清 ※ブロッキングには、ご使用になる2次抗体と同じ動物種の正常血清をご使用ください。例えば、2次抗体にRabbit Anti mouse IgGを用いる場合には、ブロッキングには正常ウサギ血清が適しています。
● 染色法：	ABC法（Vector Laboratories社・Avidin-Biotin-complex法）アルカリホスファターゼ（AP）希釈率＝100倍基質＝黒色（Vector Laboratories社・BCIP/NBT Substrate Kit）

抗8-OHdG/8-oxo-dG抗体免疫組織染色プロトコル酸化ストレス測定マーカー研究用

抗原賦活プロセス：

電子レンジを用いる方法：

1)	500ｍLガラスビーカーにスライドと10ｍM クエン酸バッファ（pH6.0）を入れ、軽く蓋をして、 ”調理（電子レンジ強）”で沸騰するまで加熱する。スライドグラスが剥がれないように、セランコート処理したものを用いる。
2)	沸騰後、更に加熱し5分間沸騰させる。
3)	1時間ほどかけて徐冷する。※急冷しないこと。
4)	ABC法にて染色を行う。

オートクレーブを用いる方法：

上記電子レンジを用いる方法と同様とし、加熱条件を121℃10分間とする。

抗8-OHdG/8-oxo-dG抗体免疫組織染色プロトコル酸化ストレス研究用

【過酸化水素処理について】

内因性ペルオキシダーゼの不活化処理として過酸化水素処理が知られておりますが、過酸化水素より発生するヒドロキシラジカルは組織中の正常dGに直接反応して8-OHdGを生成します。過酸化水素処理はなるべく避けるようお奨めいたします。
抗8-OHdG抗体	使用説明書	文献情報/技術情報

抗8-OHdG/8-oxo-dG抗体免疫組織染色プロトコル酸化ストレス研究用

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