マウス酸化LDL測定キット(mouse ox-LDL assay kit)：酸化ストレスマーカー研究用試薬【日本老化制御研究所】

Rev.190320

脂質酸化損傷マーカー
Biomarkers for lipid oxidation.

酸化ストレス研究用試薬


（本製品は研究用試薬です）

【代表的な血中脂質過酸化マーカー】

LDL（low density lipoprotein）は血液中においてコレステロール輸送を担っています。生体内において過剰なフリーラジカルが発生するとLDLに含まれる脂質が酸化され、酸化LDLが形成されます。通常、LDLはLDL受容体を通じて肝臓に取り込まれますが、酸化したLDLは、LDL受容体ではなく、スカベンジャー受容体を通してマクロファージに取り込まれるようになります。 LDLを多量に取り込んだマクロファージは泡沫化し、血管内皮細胞障害、アテローム性動脈硬化病変を引き起こすと考えられています。

本キットは、マウス血清/血漿サンプルを対象に酸化LDLを測定するサンドイッチELISAキットです。
プレートには予め酸化LDLに対する抗体がコーティングされており、サンプル及びキャリブレーターの酸化LDLがトラップされます。ビオチン標識した抗-酸化LDL抗体、続いてアビジン標識したHRPを反応させ、最後にTMBによる発色反応を用いて検出します。

【製品仕様】

測定対象：	マウス血清/血漿中の酸化LDL
測定原理：	サンドイッチELISA法
測定レンジ：	31.2～2000 pg/mL
所要時間：	約4.5時間
サンプル所要量：	20μL（1000倍希釈したものを100μl/well使用します）
テスト数：	96 wells
必要な器具：	マイクロプレートリーダー（測定波長450nm）、8チャンネルピペット、マイクロピペット（10～1000μL用）、エッペンチューブ等（キャリブレーター、サンプルの希釈に使用）、生理的リン酸緩衝液（0.01M, pH7.0～7.2）
保存条件：	凍結（≦-20℃）

【キットの構成】

1）マイクロプレート：	（8 wells *12本分割式）	凍結保存
2）キャリブレーター：	2本（4000 pg/mL）	凍結保存。キャリブレーター希釈液 1mLにて溶解後、1/2系列希釈して使用します。
3）キャリブレーター希釈液：	20 mL x 1本	そのまま使用します
4）検出試薬A：	120 μL x 1本	凍結保存。使用直前に希釈液Aにて100倍希釈します。
5）検出試薬B：	120 μL x 1本	凍結保存。使用直前に希釈液Bにて100倍希釈します。
6）希釈液A：	12 mL x 1本
7）希釈液B：	12 mL x 1本
8）TMB試薬：	9 mL x 1本	そのまま使用します
9）反応停止液：	6 mL * 1本	そのまま使用します
10）洗浄液(30倍濃縮)：	20 mL * 1本	蒸留水にて30倍希釈（例：20mL + 580mL）します

※操作方法等は予告なく改訂される場合があります。ご使用前に商品同梱の使用説明書を必ずご確認ください。

【測定手順】

Step 1）	キットを室温（18～25℃）に戻します。マイクロプレートは使用する分だけ取り出し、残りは袋に入れ、直ちに冷凍保存します。
Step 2）	キャリブレーターを調製します。キャリブレーターをキャリブレーター希釈液1.0mLにて溶解します（4000 pg/mL）。キャリブレーター希釈液を用いて1/2希釈系列を作成します。調製する濃度は、2000、1000、500、250、125、62.5、31.2 および 0 pg/mLです。
Step 3）	サンプルを調製します。血清/血漿サンプルの場合にはPBSにて1000倍希釈します。尚、サンプル中の酸化LDL濃度によって、希釈率の調整が必要になる場合があります。例）血清20μL + PBS 180μLを混合 ⇒ 10μLを分取しPBS 990μLと混合
Step 4）	マイクロプレートにサンプル/スタンダードを100μL分注します（N=2を推奨）。
Step 5）	プレートをしっかりシールして、室温にて2時間インキュベートします。
Step 6）	反応液を捨てます。【注意】洗浄しないでください
Step 7）	検出試薬Aを調製し、100μL/well分注します。
Step 8）	プレートをしっかりシールして、室温にて1時間インキュベートします。
Step 9）	反応液を捨て、洗浄液 350μL/wellを入れ1～2分静置、3回洗浄します。
Step 10）	検出試薬Bを調製し、100μL/well分注します。
Step 11）	プレートをしっかりシールして、室温にて30分間インキュベートします。
Step 12）	反応液を捨て、洗浄液 350μL/wellを入れ1～2分静置、3回洗浄します。
Step 13）	TMB試薬を 90μL/wel分注し、37℃暗所にて15～25分インキュベートします。
Step 14）	反応停止液を50μL/well分注し、450nmにおける吸光度を測定します。

品名	商品コード	測定波長	価格
マウス酸化LDL測定キット	KLD-067K	450 nm	－

【製造元】：Kamiya Biomedical Company, U.S.A.

※表示価格に消費税は含まれておりません。ご請求時には消費税が別途加算されます。
製品の仕様、価格、操作方法等は予告なく変更される場合があります。
特に操作方法につきましては、ご使用前に商品同梱の使用説明書を必ずご確認ください。

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【ご注意】

弊社の提供する試薬、受託分析サービス等は全て研究用です。研究以外の用途（臨床検査/診断/医療行為等）には使用できません。

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マウス/mouse酸化LDL/ox-LDL測定キット（動脈硬化や高血圧症、糖尿病などの生活習慣病に関連する酸化ストレスマーカー）: 日本老化制御研究所